Bij de typische synthese van DNA, RNA en niet-natuurlijke nucleïnezuren speelt de stap van het ontschermen en koppelen een cruciale rol.
De ontschermingsstap is het verwijderen van de DMT-groep op de vaste drager of de 5'-hydroxylgroep op het voorgaande nucleoside met organisch zuur, en het blootstellen van de hydroxylgroep voor de volgende koppelingsstap.Het 3% trichloorazijnzuur in dichloormethaan of tolueen wordt meestal gebruikt om de ontschermingsstap uit te voeren.De concentratie trichloorazijnzuur en de ontschermingstijd (deblokkeringstijd) domineren de zuiverheid van de eindproducten.Een lage concentratie en onvoldoende deblokkeringstijd laten een niet-gereageerde DMT-groep achter, waardoor de opbrengst afneemt en de ongewenste onzuiverheden toenemen.De lange deblokkeringstijd kan leiden tot depurine van gesynthetiseerde sequenties, waardoor onverwachte onzuiverheden ontstaan.
De koppelingsstap is gevoelig voor het watergehalte van oplosmiddelen en het vocht in de lucht.De waterconcentratie in de synthese moet minder dan 40 ppm zijn, beter minder dan 25 ppm.Om de watervrije syntheseconditie te behouden, moet de synthese van nucleïnezuren worden uitgevoerd in een omgeving met lage luchtvochtigheid. Daarom raden wij onze klant aan om deAmidieten opgeloste apparatuur, dat het poedervormige of olieachtige fosforamidiet kan oplossen in watervrij acetonitril om contact met lucht te vermijden.
Omdat fosforamidieten oplossen is het beter in de niet-watersituatie, en moleculaire vallen om het sporenwater in de reagentia en amidiet te adsorberen, is het nodig om deMoleculaire vallen.Wij adviseren 2 g zeef voor reagensflessen van 50-250 ml, 5 g voor reagensflessen van 250-500 ml, 10 g voor reagensflessen van 500-1000 ml en 20 g voor reagensflessen van 1000-2000 ml.
Het oplossen van fosforamidieten moet worden uitgevoerd onder de inerte atmosfeer, en het vervangen van activatorreagentia en acetonitril moet op tijd worden voltooid.De Capping- en Oxidatie-reagentia moeten zo snel mogelijk worden gebruikt, de geopende reagentia geven een kortere houdbaarheid en minder activiteit tijdens de synthese.
Posttijd: 09-aug-2022