Het basisprincipe van DNA-synthese

De chemische DNA-synthese is gebaseerd op de vaste-fase-synthesestrategie en de fosforamidietchemie.Anders dan bij de biologische DNA-synthese is het materiaal bij de chemische DNA-synthese DMT (4,4-dimethoxytrityl) en met fosforamidiet gemodificeerd deoxyriboxyside, zoals weergegeven in figuur 1. De DNA-synthese wordt uitgevoerd op de vaste drager (we kunnen verschillende soortenOligo Synthesekolom), dwz CPG (glas met gecontroleerde poriën) en PS (polystyreen), en de hele synthese wordt uitgevoerd op eenDNA/RNA-synthesizer, wat onze belangrijkste apparatuur is, heeft een ander model zoals: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 en enz., de syntheserichting is van 3 'naar 5', en een nucleotide wordt via één in de vaste drager geïntroduceerd synthese cyclus.Een typische synthesecyclus omvat vier stappen: ontscherming, koppeling, capping en oxidatie (Figuur 2).De ontscherming is ingesteld om de DMT-groep op de vaste drager of de 5'-hydroxylgroep op het vorige nucleoside te verwijderen; het 3% trichloorazijnzuur in dichloormethaan wordt gebruikt als het ontschermingsreagens.Vervolgens liet men het met fosforamidiet gemodificeerde deoxyriboxyside de hydroxylgroep blootstellen met behulp van een activator, dat wil zeggen 5-ethylthiotetrazol of 4,5-dicyanoimidazool, waardoor de fosfiettriester (III) werd gevormd, en werd de koppelingsstap gerealiseerd.Er wordt een capping-stap uitgevoerd om de niet-gereageerde hydroxylgroep tijdens de koppelingsstap te blokkeren, om de vorming van ongewenste defectsequenties te minimaliseren.Tenslotte wordt de onstabiele fosfiettriester (III) geoxideerd tot chemisch stabiele fosfortriester (V) met jodium als oxidatiemiddel in de aanwezigheid van pyridine.

Het gesynthetiseerde DNA zou door aminolyse van de vaste drager kunnen worden gesplitst, de 2-cyanoethyl-beschermde groep op de fosfortriester en het amide op de nucleobase worden tegelijkertijd gesplitst, de syntheseplaten en synthesekolommen in rekken worden direct in de reactiekamer geplaatst van deOntschermingsapparatuur.Ruw DNA kan op aanvraag worden bereid door middel van HPLC, elektroforese en OPC. Wij kunnen u ook de benodigde materialen leverenZuiveringsapparatuurvoor nabewerking.